化学发光免疫仪常见的厂商：罗氏，雅培，贝克曼，西门子，迈瑞，安图，新产业，迈克，亚辉龙

化学发光免疫分析方法创建于1977年，由Halmann等人在放射免疫分析和酶免疫实验理论的基本上，将免疫反应的高特异性与化学发光的高灵敏性结合起来，建立的一种用于检测微量抗原、抗体、激素、酶等的新型免疫学分析方法。化学发光物质经催化剂的催化和氧化剂的氧化，形成一个激发态的中间体，当这种激发态中间体，回到稳定的基态时，同时发射出光子，这就是化学发光的原理。固相载体分为板式分离和磁珠分离，板式分离可选择不透明的白色平板，以减少光管道和串扰，但现在大多选择了磁微粒(超顺磁珠)，较板式分离扩大抗原抗体结合表面积，增加抗原或抗体的结合量，提高检测灵敏度，加快反应速度，迅速捕获抗原抗体。易于结合相、游离相的分离，提高检测准确性。

直接化学发光免疫测定

它是用化学发光物质(吖碇酯或异鲁米诺)等直接标记抗体(或抗原)与待测标本中相应的抗原(或抗体)发生免疫反应后，形成固相包被抗体-待测抗原-发光物质标记抗体复合物，这时只需加入氧化剂过氧化氢和氢氧化钠形成碱性环境，发光物质在不需要酶的催化作用下分解、发光。新产业和雅培所使用的吖啶脂不同的是，新产业使用异硫氰酸英光素(FITC)和抗异硫氰酸荧光素抗体(Anti-FITC)简化了抗体的设计，所用的磁珠作为所有免疫测试的通用分离工具，使得新产业的检测项目覆盖较广、特别是一些稀有项目上。为提高吖啶酯检测系统的灵敏度有以下方法:1.通过修饰吖酯本身化学结构，比如在磺酰胺离去基团上引入特定的吸电子基团，提高产光效率[21:2提高吖啶酯的亲水性能，使检测试剂有更低的背景，从而提高信比:3.加入表面活性剂，增加吖啶酯的产光效率。

优势:试剂稳定性好，易于保存;标记物为小分子，对标记的抗原/抗体的空间位点几乎不造成影响;外界环境干扰较少，本底低，结果稳。

酶促化学发光免疫测定

它是用参与催化某一化学发光反应的酶如辣根过氧化物酶(HRP)或碱性磷酸酶(ALP)来标记抗原或抗体，在与待测标本中相应的抗原(或抗体)发生免疫反应后，形成固相包被抗体-待测抗原-酶标记抗体复合物，经洗涤后加入底物(发光剂),酶催化和分解底物发光。Luminol/H202/HRP体系，鲁米诺及其衍生物激活酶为辣根过氧化物酶(HRP)，用HRP标记抗原或抗体以鲁米诺或异鲁米诺及其衍生物作发光底物，对碘苯酚或对苯基酚等作增强剂，用NaOH+H202作发光启动试剂，反应2min后，光强度达到最高峰20min后，光强度减少20%。Dioxetane/AP/Enhance System体系AMPPD激活酶为碱性磷酸酶(ALP)，用碱性磷酸酶(ALP)标记抗原或抗体，用AMPPD作发光底物，在发光底物中加入聚氨苄乙烯苄基二甲基铵(BDMQ)或BSA等增强剂，发光15min时强度达到高峰，15-60min内光信号强度维持一致。

优势:发光过程中作为标记物的酶基本不被消耗，发光信号强而稳定，且发光时间较长;检测方式简单、成本较低。

劣势:相较直接化学发光，速度较慢，酶的活性和发光底物工作液容易受外界环境的影响,需要频繁走标。

电化学发光免疫测定

是以电化学发光剂三联吡啶钌标记抗体(或抗原),以三丙胺(TPA)为电子供体,工作电极上(阳极)加一定的电压能量，二价的三联吡啶钌[Ru(bpy)3]2+释放电子发生氧化反应，成为三价的三联吡啶钌[Ru(bpy)3]3+，同时，电极表面的三丙胺释放电子发生氧化反应，成为阳离子自由基TPA+，并迅速自发脱去一个质子而形成三丙胺自由基TPA*。这样在反应体系中就同时存在具有强氧化性的三价的三联吡啶钌[Ru(bpy)3]3+具有强还原性的三丙胺自由基TPA*。具有强氧化性的三价的三联吡啶钌[Ru(bpy)3]3+和具有强还原性的三丙胺自由基TPA*发生氧化还原反应。三价的三联吡啶钌[Ru(bpy)3]3+还原成激发态的二价的三联吡啶钌[Ru(bpy)3]2+，激发态[Ru(bpy)3]2+以荧光机制衰变并以释放出一个波长为620nm光子的方式释放能量，而成为基态的[Ru(bpy)3]2+。有研究，TritonX-100对检测低浓度三联吡啶钌有增强作用,较添加TritonX-100前灵敏度提高50倍^[4]。链霉亲和素（SA）和生物素（B）是具有很强的非共价相互作用的一对化合物，一分子SA可与4分子B相结合，链霉亲和素-生物素包被技术的信号放大作用提高了检测灵敏度，拓宽了线性范围最。三联吡啶钌分子结构简单，分子量小，可以标记于任何抗原、抗体及核酸，在一个抗体等分子上可同时标记>20个标记物分子，不影响抗体的活性。

优势:可控的反应体系快速检测时间、高精密度和高灵敏度、宽广的检测范围。

劣势：电极的造价成本高、比色池交叉污染、环境因素干扰等问题，三丙胺有毒性、易挥发性且具有腐蚀性。

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